荧光材料
FITC异硫氰酸荧光素标记单克隆抗体、多克隆抗体的组成要素
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产品别名:
FITC异硫氰酸荧光素标记单克隆抗体、多克隆抗体的组成要素
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发布时间:
2022-12-06 14:47:58
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产品规格:
100mg,500mg,可根据需求定制。大包装产品请咨询客服。
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产品纯度:
≥95%
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产品品牌:
德尔塔生物
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荧光素标记抗体(fuorochrome-coupledantibody),由荧光素和抗体两部分组成,抗体可以是单克隆抗体,也可以是多克隆抗体。
标记样品细胞的荧光素偶联抗体多为单克隆抗体,少数也可能是多克隆抗体。但无论是单克隆抗体还是多克隆抗体,其基本结构都由两部分组成,即包含有特异性结合抗原位点的Fab段和相对保守的Fc段,如图A所示。抗体的特异性表现在Fab段,标记时利用Fab段的抗原结合位点与细胞上抗原分子特异性结合,如图B所示,从而标记并且相对量化细胞表达该抗原分子的情况。但是,有些细胞表面表达FcR( Fc receptor,Fc受体),如巨噬细胞、DC、B淋巴细胞等,FcR可以与荧光素偶联抗体的Fc段结合,如图C所示。Fc与FcR的结合是相对非特异性的,与抗体种属和类别有关,一般情况下,同种属、同类抗体(如所有的鼠IgG抗体)的Fc段是相同的,所以该种属细胞上的所有该类Fc段的FcR(如与鼠1gG对应的FcγR)都可以与Fc段发生非特异性的结合。
应用荧光素偶联抗体标记样品细胞,目标是检测Fab段与抗原分子的特异性结合,Fc段与FcR的非特异性结合是混杂信号,会导致流式分析结果错误,所以需要消除这种非特异性结合的影响。消除的方法就是在用荧光素偶联抗体标记样品细胞前先“封闭”样品。考虑到目前常用的荧光素偶联抗体基本都是IgG抗体,所以可以用无关IgG抗体先与样品细胞孵育一段时间,使样品细胞上的所有FcR都与无关IgG抗体的Fc段非特异结合,然后再标记荧光素偶联抗体,这时样品细胞上的FcR都已饱和,无法与荧光素偶联抗体的Fc段结合,如图D所示,也就“封闭”了与荧光素偶联抗体的非特异性结合,保证所有的结合都是抗原与荧光素偶联抗体的特异性结合。
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